تثبيت (هستولوجيا)

التثبيت وأنواع المثبتات

تهدف عمليات التثبيت fixation إلى القتل السريع والمفاجئ للخلايا مع المحافظة قدر الإمكان على بنيتها الطبيعية التي كانت عليها قبل القتل. ويتم التثبيت إما فيزيائياً أوكيميائياً.

فيزيائياً: باستعمال الحرارة والبرودة والتجفيف (التجفيف بالتبريد)
كيميائياً: باستعمال المواد الكيميائية التي تدخل في هجريب المثبتات المتنوعة

المستهدف والمثبت الكيميائي المرغوب وغير المرغوب

الهدف	المثبتات المرغوبة	مثبتات يجب تجنبها
پروتينات	Neutral Buffered Formalin, Parafomaldehyde	Osmium Tetroxide
إنزيمات	Frozen Sections	Chemical Fixatives
الدهون	Frozen Sections*, Glutaraldehyde/Osmium Tetroxide	Alcoholic fixatives, Neutral Buffered Formalin
الأحماض النووية	Alcoholic fixatives, HOPE	Aldehyde fixatives
Mucopolysaccharides	Frozen Sections	Chemical fixatives
Biogenic Amines	Bouin's~, Neutral Buffered Formalin
گلايكوجن	Alcoholic based fixatives	Osmium Tetroxide

Frozen Sections preserve RNA and Lipids despite poor morphology. Compare to Paraffin sections, synonymous to Chemical Fixatives in the table, which destroy RNA and affect some antigens BUT give good morphology.

~ A picrate

المثبتات الأكثر استعمالاً

خليط حمض الخل والكحول

حمض الخل الثلجي عشرة مل ml

كحول مطلق 30 مل ml

مثبت بوين bouin (للنواة)

محلول مائي مشبع من حمض الكبريت (المر) 15 مل ml

فورمول أوفورم ألدهيد هجريز 40% خمسة مل ml

حمض الخل الثلجي 1 مل ml

مثبت بوين الكحولي

حمض البكريك 1 غ g

فورمول أوفورم ألدهيد 40% 60 مل ml

حمض الخل الثلجي 15 مل ml

كحول 80% 150 مل ml

مثبت كاروني carnay (للنواة)

حمض الخل الثلجي عشرة مل ml

كحول مطلق 60 مل ml

كلوروفورم 30 مل ml

مثبت فلمنغ flenming قوي التأثير (للنواة)

محض الكروم (محلول مائي 1%) 15 مل ml

رابع أوكسيد الأسميوم (محلول مائي من oso هجريزه 2%) 4 مل ml

حمض الخل الثلجي (يضاف قبل الاستعمال) 1 مل ml

مثبت فلمنغ flenming ضعيف التأثير (للنواة أيضاً)

حض الكروم (محلول مائي 1%) 125 مل ml

رابع أوكسيد الأسميوم (محلول مائي 2%) 100 مل ml

ماء مقطر 775 مل ml

مثبت شامبي champy

ثاني كرومات البوتاسيوم (محلول مائي 3%) 7 مل ml

حمض الكروم (محلول مائي 1%) 7 مل ml

رابع أوكسيد الأسميوم (محلول مائي 2%) 4 مل ml

مثبت حمض الكروم وحمض الآزوت

حمض الآزوت 10% 40 مل ml

كحول مطلق 30 مل ml

حمض الكروم 0.5% 30 مل ml من محلول مائي

مثبت مزيج (كحول-خل-فورمول) (F.A.A)

كحول 95% 15 مل ml

فورم ألدهيد 40% 6 مل ml

حمض الخل 1 مل ml

ماء مقطر 30 مل ml

مثبت ريغورد regaud (للسيتوبلاسما الكوندريوم)

ثنائي كرومات البوتاسيوم (محلول مائي 3%) 80 مل ml

فورم ألدهيد أوفورمول 20 مل ml

مثبت هيلي helly

كبريتات الصوديوم 1 غ g

ثنائي كرومات البوتاسيوم (محلول مائي 3%) 50 مل ml

كلور القصدير (محلول مائي مشبع) 50 مل ml

فورم ألدهيد 40% (يضاف قبل الاستعمال) 5 مل ml

مثبت سوسا sawsa:

كلور القصدير 45 غ g

كلور الصوديوم 5 غ g

حمض ثلاثي كلور الخل 20 مل ml

حمض الخل الثلجي 40 مل ml

فورم ألدهيد 40% 200 مل ml

ماء مقطر 800 مل ml

إزالة المثبت ونزع الماء والترويق clearing

تجري إزالة المثبت بغسل الأعضاء النباتية بعد عملية التثبيت بطرق تختلف باختلاف المثبت المستعمل. وبهذا يمكن حفظها في هجريز 70% كحول ويستحسن إضافة 5% غليسيرين إذا حفظت لمدة طويلة قبل إزالة الماء, وهنا لابد من غسل العينة جيداً لإزالة الغليسيرين قبل عملية إزالة الماء التي تتم بتوضع العينات في تراكيز متصاعدة من الكحول الإيتيلي تبدأ من 5%, 10%, 20%, 30%, حتى 100% أوالأسيتون أوالكحول الميثيلي.

أما الترويق فإنه يهدف لجعل الأعضاء النباتية شفافة ويتم بواسطة هيدروكربون مناسب مثل اكزيلول.

طرق حفظ العينات

ويقصد بها الطرق التي تستعمل لحظ النباتات المراد دراستها مخبرياً وبخاصة فإننا قد لا نجد في الطبيعة جميع الأعضاء النباتية التي ينبغي دراستها في جميع فصول السنة مما يضطرنا لحفظها في سوائل خاصة تمنعها من التعفن والفساد.

تختلف طرق حفظ النباتات الراقية عن طرق حفظ الفطريات والطحالب.

بينما تحفظ الطحالب في محاليل خاصة تتصف بإبقائها على اليخضور وذلك بوضعها مباشرة في الماء المضاف له الفورمول بنسبة 5% (حجم الفورمول +19 من حجم الماء).

يجب استعمال ماء البحر للطحالب البحرية والماء العادي لطحالب المياه العذبة والتربة.

ويستعمل عادة لحفظ الطحالب المحلول التالي: ماء مقطر 100 سم cm

كافور 0.1 غ g

خلات النحاس 0.4 غ g

فورمول أربعة سم cm

ونظراً لأن استعمال الفورمول التجاري يؤدي إلى انخفاض pH الوسط فإنه من المفضل إضافة (20 غ g) من البوراكس (بورات أوكربونات الصوديوم) لكل ليتر l من الفورمول.